Skābeņskābes satura noteikšana augļos un dārzeņos, izmantojot augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfiju (HPLC)
1. Eksperimenta princips un metodes izstrāde
Kā augļos un dārzeņos bieži sastopama organiskā skābe, skābeņskābes saturs tieši ietekmē pārtikas garšu un uzturvērtību. Šajā eksperimentā tiek izmantota apgrieztās fāzes augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija (RP-HPLC). Skābā mobilās fāzes apstākļos skābeņskābe tiek atdalīta no traucējošām vielām līdz bāzes līnijai, izmantojot C18 hromatogrāfijas kolonnu. Kvantitatīvai analīzei, kuras pamatā ir karboksilgrupu UV absorbcijas raksturlielumi skābeņskābes molekulās, tiek izmantots ultravioletais detektors, kas iestatīts uz 210 nm.
2. Standarta līkne un parauga sagatavošana
Standarta šķīdumu pagatavošanai izmanto gradienta atšķaidīšanas metodi: precīzi nosver 25,0 mg skābeņskābes dihidrāta un atšķaida līdz 25 ml ar īpaši tīru ūdeni, lai iegūtu 1 mg/ml standarta šķīdumu. To secīgi atšķaida standartšķīdumu sērijā ar koncentrāciju 50, 100, 200, 400 un 800 µg/ml, katru koncentrāciju injicējot trīs reizes.
Parauga sagatavošanai izmanto mikroviļņu ekstrakciju: nosver 5,00 g augļu/dārzeņu homogenāta, pievieno 10 ml 0,1 mol/l sālsskābes šķīduma, apstrādā ar mikroviļņu krāsni 60°C temperatūrā 10 minūtes, filtrē caur 0,45 µm membrānas filtru un savāc filtrātu testēšanai.
3. Hromatogrāfisko apstākļu optimizācija
Mobilā fāze ir 0,01 mol/l kālija dihidrogēnfosfāta buferšķīduma (pH 2,5) un acetonitrila (95:5) sistēma ar plūsmas ātrumu 0,8 ml/min un kolonnas temperatūru 35 °C. Pielāgojot acetonitrila proporciju, redzams, ka, ja organiskās fāzes saturs pārsniedz 10%, skābeņskābes aiztures laiks saīsinās līdz mazāk nekā 3 minūtēm, bet notiek maksimālā "astes" veidošanās. Galīgajos optimizētajos apstākļos skābeņskābes aiztures laiks ir 4,2 minūtes, panākot pilnīgu atdalīšanu no blakus esošajām citronskābes un ābolskābes (izšķirtspēja > 1,5).
4. Metodes validācija
Lineārā diapazona verifikācija uzrāda labu lineāru sakarību starp pīķa laukumu un koncentrāciju diapazonā no 10 līdz 1000 µg/ml (R² = 0,9993). Noteikšanas robeža (LOD), kas noteikta ar signāla un trokšņa attiecības metodi, ir 0,5 µg/ml. Atkārtojamības testos RSD sešām atkārtotām viena un tā paša spinātu parauga noteikšanām ir 1,8%. Pīķa atgūstamības eksperimenti trīs līmeņos (80%, 100% un 120%) dod vidējo atgūstamību attiecīgi 98,2%, 102,4% un 97,8%, kas atbilst kvantitatīvās analīzes prasībām.
5. Reālu paraugu analīze
Tika testēti seši komerciāli pieejami augļi un dārzeņi: spināti (356 ± 12 mg/100 g), selerijas (215 ± 9 mg/100 g), tomāti (18 ± 2 mg/100 g), āboli (6 ± 1 mg/100 g), banāni (nav konstatēti) un brokoļi (89 ± 5 mg/100 g). Salīdzinājums ar valsts standarta metodi (GB 5009.277-2016) liecina, ka relatīvā novirze starp abām metodēm ir mazāka par 5%, kas apstiprina šīs metodes ticamību. Jo īpaši HPLC metodei ir augstāka jutība nekā tradicionālajām titrēšanas metodēm, analizējot paraugus ar zemu aminoskābju saturu.
6. Galvenās piezīmes
Parauga pirmapstrādes laikā stingri kontrolējiet pH vērtību. Ja ekstrakta pH pārsniedz 3, kalcija oksalāta nogulsnēšanās novedīs pie zemiem testa rezultātiem. Mobilā fāze katru dienu jāsagatavo svaiga, lai izvairītos no sāļu nogulsnēšanās un kolonnas aizsprostošanās. Pēc katrām 20 injekcijām kolonna 30 minūtes jāskalo ar acetonitrila un ūdens maisījumu (30:70), lai novērstu kolonnas efektivitātes pasliktināšanos. Pigmentus saturošiem paraugiem (piemēram, purpura kāpostiem) pirms injekcijas ieteicams pievienot cietfāzes ekstrakcijas attīrīšanas posmu.
7. Lietošanas un paplašināšanas norādījumi
Šo metodi var paplašināt, lai noteiktu skābeņskābi bioloģiskajos paraugos, piemēram, urīnā un asinīs. Pielāgojot kustīgās fāzes sastāvu (piemēram, pievienojot tetrabutilamonija hidroksīdu), vienlaikus var noteikt skābeņskābi un tās metabolītus. Apvienojumā ar masas spektrometrijas detektoru var izveidot precīzāku pēdu noteikšanas metodi. Pārtikas pārstrādes rūpniecībā šī metode var sniegt svarīgu datu atbalstu zema skābeņskābes satura šķirņu izvēlei un gatavošanas procesu optimizācijai.
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. – skābeņskābe
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. ir uzticams augstas kvalitātes skābeņskābes (rūpnieciskās kvalitātes, vismaz 99,6%) piegādātājs un eksportētājs no Šaņdunas, Ķīnas. Mūsu skābeņskābe ir balta kristāliska cietviela, kas pazīstama arī kā etāndiskābe, ar molekulāro formulu C₂H₂O₄. Tai ir augsta tīrības pakāpe, zems piemaisījumu saturs un stabila kvalitāte visās partijās, kas atbilst tekstila, ādas, metalurģijas, retzemju metālu apstrādes, ķīmiskās tīrīšanas un būvniecības nozaru prasībām.
Mēs piegādājam gan bezūdens, gan dihidrātu skābeņskābi, kas pieejama 25 kg, 50 kg un 1000 kg beramkravu maisos. Ar stingrām kvalitātes kontroles procedūrām, pilnīgiem testēšanas ziņojumiem un elastīgiem piegādes plāniem mēs nodrošinām stabilu piegādi un nemainīgu veiktspēju pircējiem visā pasaulē. Mūsu produkti ir plaši eksportēti uz Dienvidaustrumāziju, Eiropu, Āfriku un Ameriku, iegūstot atzinību par uzticamu kvalitāti un konkurētspējīgām cenām.
Izvēlieties Zibo Anhao Chemical, lai saņemtu uzticamu skābeņskābes piegādi un profesionālus ķīmiskos pakalpojumus no vienas pieturas vietas.
Izvēlieties Zibo Anhao Chemical augstas tīrības pakāpes skābeņskābi, kas nodrošina stabilu veiktspēju un vērtību jūsu uzņēmumam. Sazinieties ar mums, lai veiktu vairumtirdzniecības pasūtījumus vai tehniskās specifikācijas: info@anhaochemical.com
